蛋白纯化公司_蛋白纯化
1、蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤： （一）材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。
2、所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。
3、常用的破碎组织细胞的方法有： 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。
(相关资料图)
4、常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
5、 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
6、 反复冻融法 生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。
7、这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
8、 超声波法 使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
9、 酶法 如用溶菌酶破坏微生物细胞等。
10、 (二) 蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。
11、抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。
12、如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。
13、在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
14、 （三）蛋白质粗制品的获得 选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。
15、比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。
16、常用的有下列几种方法： 等电点沉淀法 不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。
17、 盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。
18、被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
19、 有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。
20、能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。
21、此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。
22、由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。
23、 （四）样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。
24、常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。
25、有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
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